非冻型组织细胞RNA保存液

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    非冻型组织细胞RNA保存液（RNAwait）是一种在较高温度下保存动物组织及细胞RNA样品的非冻型无毒溶液，它能迅速渗入细胞内，通过高效抑制RNase的活性而保存RNA的完整性。

保存条件：15–25℃，保质期2年。低温条件下有结晶析出时加热至37℃溶解后使用。

产品特点

    1．操作简单，将组织剪薄浸没在RNAWAIT中即可使其RNA不被降解。

    2．替代液氮，使样品的保存不需液氮，干冰或-80℃冰箱，尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。

    3．RNA完整，因RNAwait能迅速抑制组织中RNA酶的活性，故从中提取的RNA的质量跟液氮保存的样品相比不相上下。

    4．方便运输，处理过的样品能在25℃保存一周，使样品邮寄和运输变得容易和便宜，有利学术合作和交流。

    5．反复冻融，经RNAwait处理的样品可反复冻融20次，其间可对样品进行各种处理而不影响最终提取的RNA的质量。

    6．结果准确，RNAwait进入细胞十分快速，基因表达在发生应急改变前就得以锁定，故RNA分析更能反映取样时的真实情况。

    7．可比性强，RNAwait能减少大规模样品处理中的误差，增加各次实验数据间的可比性，对大规模基因表达谱的分析尤其有用。

    8．兼容性广，处理过的样品可以使用TRIzol 等试剂提取其RNA，样品还可直接用于组织切片，免疫学和流式细胞分析而不影响RNA的质量。

技术指标

37℃          一天(保存三天的样品RNA有部分降解)

18-25℃       一周(保存两周的样品RNA有轻微降解)

 2-8℃        一个月

-20℃和-80℃  长期

操作流程：

     1.根据要保存的各样本的体积，计算出所需RNAwait用量。RNAwait的用量应当是组织体积的10倍（100mg组织约用1ml RNAwait）；离心收集2×107细胞RNAwait的用量是1ml。加入RNAwait的原则是：量宁多勿少。建议在实际操作中不要称量组织，而直接根据目测结果加入RNAwait量，以加快操作和减少污染。例如5mm边长的立方体组织块，体积为125mm3=125µl，故应当加入1．25ml的RNAwait液。

     2.将RNAwait按需要量分装入自备保存管中。

     3.快速将较大的组织切成厚度<0．5 cm的任意片状，较小的组织直接取下，立即完全浸入RNAwait中。组织的厚度一定要<0．5 cm。组织过厚则RNAwait不能有效渗入，组织中间部位的RNA不能受到保护。较大的组织可以切成厚度<0．5 cm的任意片状后保存，较小的组织（如大鼠的肾脏、脾脏，小鼠的大部分器官）则可以直接浸入RNAwait。

     4.将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超过该温度下的最长存放时间(请看技术指标)，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在4℃放置过夜后再转移到最后的温度。注：将样品转移到-20℃或-80℃前，需要弃掉保护液。

注意事项：

    1．组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。

    2．冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。

    3．保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复温到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。

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