胶原酶V/ Collagenase Ⅴ

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说明：胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。

溶解性：可溶于TES缓冲液，Hank's平衡盐和Earles平衡盐等溶液。溶液在-20℃可稳定保存数月。

胶原酶Ⅴ（来源溶组织梭菌）包含至少 7 种蛋白酶成分，分子量从 68-130KD 不等。它可用于胰腺小岛组织的分离， 将结缔组织分离成单个细胞。消化软骨组织的浓度一般为 1-2 mg/ml，消化肝脏组织大约 1 mg/ml。 但是具体的消化浓度因种属特异性而异。很多文献指出胶原酶可以消化多种组织，胶原酶的使用浓 度一般为 0.1- 5 mg/ml，消化过程中可以搅拌以促进酶的消化作用。胶原酶在消化的过程中可以引起 细胞的少量死亡，一般消化时间为 15min 至数小时。如果浓度发生变化那么消化时间可能更长。消化过程中首选的缓冲液为含钙离子和 BSA 的 Krebs Ringer Buffer。 在消化的过程中如果细胞大量死亡则需要降低酶量，同时可以加入0.5%BSA或5-10%血清来稳定细胞的状态和消化效果。胶原酶的灭菌首先离心或者用0.8µm的滤器去掉不溶物。然后再用0.2µm 的滤器过滤除菌。 对于组织培养方面的应用，胶原酶可以用不含钙离子的溶液配制如hanks，ebss等。

       0.05 - 0.1 mg/ml 胶原酶溶于50 mM TES buffer，pH 7.4 (37 ℃) 含 0.36 mM 氯化钙。反应体系 的终浓度为50 mM TES，0.36 mM 氯化钙，25 mg 胶原，0.005-0.01 mg 胶原酶。

       酶液在含有 0.3-0.5 mM 钙离子的中性 PH 条件下可以在 37 ℃维持活性 15 小时。在-20℃可以维 持数月。

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